Tecnologia KASP

Você precisa identificar SNPs, deleções ou inserções de forma rápida? Já conhece a tecnologia KASP?

Os ensaios de genotipagem KASP ™ são baseados em PCR específico para alelo competitivo e permitem a pontuação bialélica de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) e inserções e deleções (Indels) em loci específicos.

A mistura de primers específicos e o master mix de KASP universal são adicionadas às amostras de DNA, é feita uma reação de PCR comum e em seguida a fluorescência pode ser lida.
Componentes do ensaio:

O assay mix KASP contém três oligos não marcados específicos do ensaio: dois primers Forward específicos de cada alelo e um primer reverso comum. Cada um dos primers específicos de cada alelo abriga uma sequência de cauda única que corresponde a um cassete FRET universal (transferência de energia ressonante de fluorescência); um marcado com corante FAM™ e o outro com corante HEX™. O KASP Master mix contém os cassetes FRET universais, corante de referência passivo ROX™, taq polimerase, nucleotídeos e MgCl2 em uma solução tampão otimizada.
Durante o PCR, o primer específico do alelo relevante se liga ao molde e se alonga, anexando assim a sequência da cauda à fita recém-sintetizada. O complemento da sequência da cauda específica do alelo é então gerado durante as rodadas subsequentes de PCR, permitindo que o cassete FRET se ligue ao DNA. O cassete FRET não é mais apagado e emite fluorescência. A PCR competitiva de alelo-específico atinge discriminação bialélica por meio da ligação competitiva dos dois primers diretos específicos de alelo. Se o genótipo em um determinado SNP for homozigoto, apenas um dos dois sinais fluorescentes possíveis será gerado. Se o genótipo for heterozigoto, um sinal fluorescente misto será gerado.
Essa tecnologia permite utilizar um mastexmix comum para diversos conjuntos de primers específicos, tornando o ensaio mais barato.

Assista ao vídeo para saber mais:

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